Коронавирус синдрома острой диареи свиней (SADS-CoV) — это недавно обнаруженный кишечно-патогенный коронавирус свиней, который может вызывать водянистую диарею у новорожденных поросят и наносить значительный экономический ущерб свиноводству.В настоящее время не существует подходящего серологического метода для оценки эффективности инфекции SADS-CoV и вакцины, поэтому существует острая необходимость в использовании эффективного иммуноферментного анализа (ИФА) для восполнения этого недостатка.Здесь была сконструирована рекомбинантная плазмида, экспрессирующая шиповидный белок SADS-CoV (S), слитый с Fc-доменом IgG человека, для получения рекомбинантного бакуловируса, который экспрессировался в клетках HEK 293F.Белок S-Fc очищают с помощью смолы протеина G и сохраняют реактивность с антителами против Fc человека и против SADS-CoV.Затем белок S-Fc использовали для разработки непрямого ELISA (S-iELISA) и оптимизации условий реакции S-iELISA.В результате, анализируя значение OD450nm 40 SADS-CoV-негативных сывороток, подтвержденное иммунофлуоресцентным анализом (IFA) и Вестерн-блоттингом, пороговое значение было определено как 0,3711.Коэффициент вариации (CV) 6 SADS-CoV-положительных сывороток внутри и между сериями S-iELISA был менее 10%.Тест на перекрестную реактивность показал, что S-iELISA не имеет перекрестной реактивности с другими свиными вирусными сыворотками.Кроме того, на основании обнаружения 111 образцов клинической сыворотки общая степень совпадения ИФА и S-iELISA составила 97,3%.Тест на нейтрализацию вируса с 7 различными значениями OD450nm сыворотки показал, что значение OD450nm, обнаруженное с помощью S-iELISA, положительно коррелировало с тестом на нейтрализацию вируса.Наконец, S-iELISA был выполнен на 300 образцах сыворотки свинофермы.Коммерческие наборы других свиных энтеровирусов показали, что уровни положительного IgG SADS-CoV, TGEV, PDCoV и PEDV составляли 81,7%, 54% и 65,3% соответственно., 6% соответственно.Результаты показывают, что S-iELISA является специфичным, чувствительным и воспроизводимым и может использоваться для выявления инфекции SADS-CoV в свиноводстве.Эта статья защищена авторским правом.все права защищены.
Время публикации: 22 июня 2021 г.